108回薬剤師国家試験　問97〜98　L-アラニンの純度試験／定量法

ある化合物が医薬品として適合するかどうかの判定は、分離分析、定性分析及び定量分析を駆使して行われる。次の記述は、日本薬局方L-アラニン（C₃H₇NO₂：89.09）の純度試験（一部要約）及び定量法である。

純度試験
試料溶液及び標準溶液20μLずつを正確にとり、次の条件で液体クロマトグラフィーにより試験を行う。試料溶液及び標準溶液から得たピーク高さから試料溶液1mLに含まれるアラニン以外のアミノ酸の質量を求め、その質量百分率を算出するとき、アラニン以外の各アミノ酸の量は0.1%以下である。

試験条件
検出器：可視吸光光度計（測定波長：570nm）
カラム：内径4.6mm、長さ8cmのステンレス管に3μmのポリスチレンにスルホン酸基を結合した液体クロマトグラフィー用強酸性イオン交換樹脂（Na型）を充填する。
〜（中略）〜
移動相：移動相AからEの順に切り換える。
反応試薬：ニンヒドリンを含む溶液
〜（以下略）〜

定量法
本品を乾燥し、その約90mgを精密に量り、ギ酸3mLに溶かし、酢酸（100）50mLを加え、0.1mol/L過塩素酸で滴定する（電位差滴定法）。同様の方法で空試験を行い、補正する。

0.1mol/L過塩素酸1mL＝「　ア　」mgC₃H₇NO₂

問97　純度試験に用いた液体クロマトグラフィー（LC）に関する記述のうち、正しいのはどれか。2つ選べ。

一般に、この検出器の光源にはタングステンランプが用いられる。
固定相は陰イオン交換体である。
移動相はAからEの順に、pHが大きくなる。
このLCは、プレカラム誘導体化法である。
アラニンとプロリンは同じ呈色物質を生成する。

解答・解説

解答
１、３

解説
１　正
問題文に「検出器：可視吸光光度計（測定波長：570nm）」と記載されているため、この検出器の光源として、可視光線を放出するタングステンランプを用いることが可能である。

２　誤
本試験では、カラム（固定相）として、ポリスチレンにスルホン酸基を結合した強酸性イオン交換樹脂（Na型）を充填していることから、固定相は陽イオン交換体である。

３　正
アミノ酸は、両性化合物であり、移動相のpHが低い酸性側では正に帯電しており、陽イオン交換樹脂（固定相）に保持される。移動相のpHを高くしていくと、アミノ酸は等電点に到達し、電荷が±0となり、固定相から遊離する。このことから、陽イオン交換体を用いたアミノ酸の分離では、移動相を酸性からアルカリ性に変化させることで、固定相からアミノ酸が遊離することを利用して分離する。よって、本検出法において、移動相はAからEの順にpHが大きくなる。

４　誤
本試験では、反応試薬としてニンヒドリンを使用していることから、ポストカラム誘導体化法である。

５　誤
ニンヒドリン試薬と反応すると、第一級アミノ酸（アニリンなど）は紫色、第二級アミノ酸（プロリン）は黄色を呈する。

問98　定量法に関する記述のうち、正しいのはどれか。2つ選べ。