第105回薬剤師国家試験　問116

2020年8月23日

第105回薬剤師国家試験　問116

タンパク質Xは、細胞質内ではサブユニットA（分子量60,000）とサブユニットB（分子量30,000）がそれぞれ1つずつ非共有結合で会合したヘテロ二量体を形成している。タンパク質Xは、増殖因子Fの刺激によりサブユニットAのみチロシン残基がリン酸化され、サブユニットBと解離する。培養細胞を用いて以下の実験を行った。予想される結果として正しいのはどれか。１つ選べ。

ただし、Fによる刺激で、A、B両サブユニットの発現量に変化はなく、分解も起こらないこと、また、チロシン残基がリン酸化されても、電気泳動移動度、抗Aによる免疫沈降及びウエスタンブロット法における認識には変化がないことを確認している。

解答・解説

解答
1

解説
●増殖因子Fにより刺激しない場合
タンパク質Xが解離しない状態（AB）に抗Aを加える→ABのAの部分に抗Aが結合し、沈降物にはABが含まれる。この沈降物をSDS−ポリアクリルアミドゲル電気泳動する→AとBが解離し電気泳動される→A（分子量：60,000）はB（分子量：30,000）より大きいため、泳動距離が短くなる。
＜抗Pi−Tyrを用いたウエスタンブロット法＞
Aのチロシン残基はリン酸化されないため、検出されない。
＜抗A、抗Bを用いたウエスタンブロット法＞
抗Aを用いたウエスタンブロット法の方が抗Bを用いたウエスタンブロット法より泳動距離が短い。

●増殖因子Fにより刺激した場合
タンパク質XがAとBに解離し、Aのチロシン残基がリン酸化された状態に抗Aを加える→A（リン酸化された状態）に抗Aが結合し、沈降物にはA（リン酸化された状態）が含まれる。この沈降物をSDS−ポリアクリルアミドゲル電気泳動する。
＜抗Pi−Tyr、抗Aを用いたウエスタンブロット法＞
抗Pi−Tyrと抗Aを用いたウエスタンブロット法では、同じ泳動距離となる。
＜抗Bを用いたウエスタンブロット法＞
Bが含まれないため、検出されない。