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第110回薬剤師国家試験 問118

マクロファージをリポ多糖で刺激して得た培養液を採取し、この培養液中のサイトカインXの濃度をサンドイッチELISAEnzyme-linked immunosorbent assay)法で定量することにした。
各試料をマイクロプレートに採取し反応を行った後、450 nmの吸光度を測定した。 サイトカインXの標準物質を用いて標準曲線(検量線)を作成したところ、下図のようになった。この測定に関する記述として適切なのはどれか。2つ選べ。

 

  1. この培養液の測定値が吸光度1.5であった場合、培養液を希釈して再測定することが必要である。
  2. 10倍希釈した培養液の測定値が吸光度0.6である場合、もとの培養液中のサイトカインX濃度は約600pg/mLである。
  3. 培養液に含まれる別のサイトカインYを測定するためには、サイトカインXの測定とすべて同じ抗体を利用できる。
  4. サンドイッチELISA法では抗原に対する2種類の抗体が使われるが、それぞれの抗体が認識するエピトープは異なる。
  5. この培養液の測定で発色が検出限界以下だった場合、標準曲線(検量線)の測定の場合よりも反応時間を長めにしてもよい。
解答・解説

解答
14

解説
1 正
設問の標準曲線(検量線)の吸光度(測定波長:450nm)は、約0.9までのプロットされていることから、吸光度1.5は範囲外であり、適切な範囲に入るように希釈して再測定する必要がある。

2 誤
標準曲線(検量線)より、10倍希釈した培養液の測定値が吸光度0.6のとき、サイトカインXの濃度は約600pg/mLである。10倍希釈した培養液のサイトカインXの濃度が約600pg/mLであることから、もとの培養液中のサイトカインX濃度は約6,000pg/mL6ng/mL)である。

3 誤
ELISA法では、抗体が特定の抗原に特異的に結合するため、サイトカインXと異なるサイトカインYを測定するには、Yに特異的な抗体を用いる必要がある。

4 正
サンドイッチELISAでは、捕捉抗体と検出抗体の2種類の抗体を用いる。両方の抗体が同じエピトープを認識すると、競合現象が起こり測定結果に影響が現れるため、それぞれ異なるエピトープを認識する抗体を用いる必要がある。

5 誤
反応時間を長くすると、正確な定量が困難なため、検出限界以下の場合、試料を濃縮するなど別の方法を検討する必要がある。

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