第101回薬剤師国家試験　問117

ヒト細胞における既知遺伝子の発現をPCR（polymerase chain reaction）法により検出するために以下の実験を行った。実験方法と考察に関する記述のうち、正しいのはどれか。２つ選べ。
【実験】
ヒト細胞から抽出したRNAを用いて、逆転写反応により相補的DNA（cDNA）を合成した。このcDNAを鋳型として、既知遺伝子の部分的塩基配列を増幅する特異的なセンスプライマー及びアンチセンスプライマーを用いて、定法に従い24、26、29及び33サイクルでのPCR法を行った。得られた増幅DNA断片をDNA検出試薬を含むアガロースゲル電気泳動法にて分離し、図のような結果（レーン1〜4）を得た。なお、レーン番号の順序は、サイクル数の順序とは一致しない。また、各サイクルでのDNA増幅率はほぼ100％であり、上記サイクル数の間では、DNAは指数関数的に増幅された。

1. PCRとは、DNAの熱変性→プライマーのアニーリング→DNA鎖の合成・伸長からなる3段階反応を同一の温度下において繰り返すことで、目的DNAを増幅する反応である。
2. 本実験で行った逆転写反応では、mRNAの5´末端に相補的な配列をもつプライマーを用いた。
3. レーン1〜4のDNA断片のうち、レーン1は26サイクルのDNA断片と考えられる。
4. 図の結果より、増幅されたDNA断片は正の電荷を帯びていると考察できる。
5. 図中のレーン2とレーン3では、両者のDNA量は理論上約16倍異なると考察される。