第110回薬剤師国家試験　問100　高速液体クロマトグラフィー

フェノール、パラオキシ安息香酸及びトルエンを含む混合物試料を高速液体クロマトグラフィー（HPLC）により分析した。このことに関する記述として正しいのはどれか。2つ選べ。なお、HPLCの分析条件は以下のとおりである。

分析条件
検出器：紫外吸光光度計（測定波長：270 nm）
カラム：内径 4.6 mm、長さ15 cm のステンレス管に粒径5μmの液体クロマトグラフィー用オクタデシルシリル化シリカゲルを充てんする。
カラム温度：35 ℃付近の一定温度
移動相：pH 7.0 の 0.1 mol/Lリン酸緩衝液／メタノール（3：1）混液

使用したHPLCは順相クロマトグラフィーである。
3つの化合物のうち、最後に溶出するのはトルエンである。
カラム温度を高くするとピーク高さは大きくなり、ピーク面積は減少する。
パラオキシ安息香酸の保持時間を長くするには、移動相中の緩衝液のpHを低くする。
トルエンの保持時間を長くするために、移動相中のメタノールの比率を高くする。

解答・解説

解答
2、4

解説
１　誤
使用したHPLCには、極性の低いオクタデシルシリル化シリカゲルを固定相に用いているため、逆相クロマトグラフィーに該当する。なお、順相クロマトグラフィーとは、極性の高い固定相を用いるクロマトグラフィーことである。

２　正
オクタデシルシリル化シリカゲルは、極性が低いため、極性の低い試料と親和性が高い。芳香環は疎水基であり、結合する置換基により極性が異なる。炭素が結合するほど極性は低くなり、それに対して、極性基であるカルボキシ基やヒドロキシ基が結合すると極性が高くなる。よって、極性はパラオキシ安息香酸＞フェノール＞トルエンの順に低くなる。混合物試料のうち、トルエンが最も極性が低いため、オクタデシルシリル化シリカゲル（固定相）に最も強く保持されるため、最後に溶出する。

３　誤
カラム温度の上昇により試料の移動速度が速くなるため、保持時間は短くなり、バンドの広がりも抑えられる。その結果、ピーク高さは大きくなるが、ピーク面積は試料の量に比例するため、温度変化によってピーク面積が減少することはない。

４　正
パラオキシ安息香酸は酸性物質であり、pHを低くすると非電離型（分子形）が増加する。分子形は極性が低いため、極性が低い固定相に強く保持されるようになり、保持時間が長くなる。

５　誤
移動相中のメタノールの比率を増やすと、移動相全体の極性が低下する。その結果、極性が低いトルエンは移動相により溶け込みやすくなり、固定相に留まりにくくなるため保持時間は短くなる。よって、保持時間を長くしたい場合には、移動相中のメタノールの比率を下げるべきである。