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液体クロマトグラフィー

概要

液体クロマトグラフィーは、適切な固定相を充填したカラムに試料を注入し、移動相として液体を用いることで、成分ごとの固定相との相互作用(吸着、分配、イオン交換、サイズ排除など)の違いを利用して分離・分析を行う手法である。液体、溶媒に溶解する物質を測定することが可能である。

装置

カラム

固定相の違いにより、吸着型分配型イオン交換型サイズ排除型アフィニティー型のカラムを用いる。

カラム恒温

カラム温度は分離、保持時間に影響を与えるため、カラム恒温槽により、温度を一定に保つ

検出器

紫外可視吸光光度計蛍光光度計電気化学検出器質量分析計(LC−MS)など様々な検出器が用いられる。

 

アミノ酸のラベル化(誘導体化)

 

一般的に、アミノ酸の分析にはHPLC(高速液体クロマトグラフィー)が使用される。 アミノ酸
の多くは、そのままでは紫外線や放射光による検出が困難なため、ラベル化(誘導体化)が必要となる。 ラベル化には、プレラベル法(プレカラム法)とポストラベル法(ポストカラム法)の2種類があり、それぞれ以下のような特徴を示す。

 方法の違い

  • プレラベル法:カラムの前にラベル化試薬を注入し、分析対象物質と反応させる。
  • ポストラベル法:カラムの後にラベル化試薬を注入し、分離された成分と反応させる。

 

使用する試薬

  • プレラベル法:ダンシルクロリド、フェニルチオヒダントイン
  • ポストラベル法:ニンヒドリン(可視部検出)、オルトフタルアルデヒド(蛍光検出)

試薬の量

  • プレラベル法:少ない
  • ポストラベル法:多い

反応条件

  • プレラベル法:長時間の誘導体化でも分析可能
  • ポストラベル法:短時間の誘導体化のみ可能

構造の特徴

  • プレラベル法:分析対象物質固有の誘導体化のみ可能
  • ポストラベル法:1つの分析対象物質から複数の誘導体化でも生成分析可能
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